فصل وزراعة الكائنات الدقيقة

一 、 الفصل والزراعة

توجد الكائنات الدقيقة في حالة مختلطة في الطبيعة. للحصول على السلالات المرغوبة ، يجب فصلها عنها. إذا كانت ملوثة عن طريق الخطأ عندما يتم حفظها ، يجب تنقيتها. هناك العديد من الطرق لفصل وتنقية الكائنات الحية الدقيقة ، ولكن المبدأ الأساسي مشابه. أي أن العينة المراد فصلها مخففة إلى حد ما ، وتحفظ خلايا (أو جراثيم) الكائنات الدقيقة في حالة مشتتة قدر الإمكان ، ثم يزرع في مستعمرة واحدة نقية. ومع ذلك ، فإن العمل المذكور أعلاه لا ينفصل عن عملية التطعيم ، وهو نقل كائن دقيق إلى وسط معقم آخر.

مواد وأداة تصنيف التطعيم الميكروبيولوجي:

حاضنة بدرجة حرارة ثابتة ، حلقة للتلقيح ، قضيب زجاجي ، ماصّة ، مصباح كحول ، متوسط زراعة ، E. coli ، عصية فرعية ، مكورات العنقودية الذهبية ، خميرة ، إلخ.

طريقة تشغيل التطعيم:

1. التطعيم المائل (ربط المكورات العنقودية الذهبية)

قبل التشغيل ، امسح يديك بالكحول ، وأشعل مصباح الكحول بعد تطاير الكحول. أمسك أنبوب الشد والسطح المائل بين الإبهام الأيسر والأصابع الأربعة الأخرى ، بحيث يكون السطح المائل والجانب ذو السلالة يواجهان لأعلى وفي وضع أفقي. أولا ، تدوير سلالة وحشا من المنحدر لجعل من السهل سحب عند التلقيح. أمسك حلقة التطعيم في يدك اليسرى (مثل مسك القلم) ، وقم بتعقيم الطرف الدائري على اللهب أولاً ، ثم قم بتعقيمه عن طريق تمديده إلى بقية أنبوب الاختبار. استخدم الإصبع الدائري والإصبع الخنصر وراحة اليد اليمنى لسحب الأنبوب الجرثومي وسدادة القطن أو غطاء أنبوب الاختبار لأنبوب الاختبار المائل في نفس الوقت ، ثم قم بتعقيم فم أنبوب الاختبار ببطء (لا تحترق ساخنًا جدًا). تمديد حلقة التطعيم المحترقة في أنبوب البذور ، اتصل بحلقة التطعيم على الجدار الداخلي لأنبوب الاختبار أو الوسط بدون طحلب ، دعها تبرد بما فيه الكفاية ، ثم كشط بلطف الطحلب الصغير ثم سحبه من حلقة التطعيم الأنبوبية. تمديد الحلقة المحصّبة بالبكتيريا بسرعة إلى أنبوب اختبار آخر ليتم توصيله. اصنع شكل "Z" من أسفل المنحدر لأعلى ولأسفل بكثافة. في بعض الأحيان ، من الممكن أيضًا استخدام إبرة تطريز لسحب خط في وسط الوسط للتلقيح المائل ، وذلك لمراقبة خصائص نمو البكتيريا. بعد اكتمال التطعيم ، يتم سحب حلقة التطعيم ويتم إدخال القابس القطني. تعقيم حلقة التطعيم. ضع حلقة التطعيم وشد سدادة القطن.

2. التطعيم السائل

توصيل الوسط المائل إلى الوسط السائل. تستخدم هذه الطريقة لمراقبة خصائص نمو البكتيريا وقياس التفاعل الكيميائي الحيوي. طريقة التشغيل هي نفسها كما كانت من قبل ، ولكن فم أنبوب الاختبار يميل إلى الأعلى ، وذلك لمنع سائل الثقافة من التدفق للخارج وتوصيل البكتيريا ، تطعيم الحلقة والجدار الداخلي للأنبوب عدة مرات لغسل البكتيريا على الحلبة. بعد التطعيم ، يتم إدخال سدادة قطنية ، ويتم وضع أنبوب الاختبار برفق في راحة اليد لتفريق البكتيريا بالكامل. تحصين الوسط السائل من الوسط السائل. عندما تكون السلالة سائلة ، استخدم ماصات أو قطارة معقمة بالإضافة إلى حلقة التطعيم. عند التلقيح ، فقط اسحب سدادة القطن بجانب اللهب ، مرر فم الأنبوب عبر اللهب ، استخدم ماصّة معقمة لامتصاص محلول البكتيريا في محلول الثقافة ، ثم يهز بالتساوي.

3. لوحة التطعيم

سجل ونشر البكتيريا على اللوحة. التلقيح عبر الخطوط انظر طريقة منفصلة عبر الخط. يحقن الانتشار والتلقيح المحلول الجرثومي في الصفيحة بماصّة معقمة ، ويغطّ سطح الصفيحة بالتساوي بقضيب زجاجي معقم.

4. التطعيم

تحصين البكتيريا في وسط الثقافة العميقة الصلبة. تستخدم هذه الطريقة لتطعيم البكتيريا اللاهوائية أو مراقبة الأداء الفسيولوجي عند تحديد البكتيريا. طريقة التشغيل هي نفسها كما هو مذكور أعلاه ، ولكن يجب أن تكون إبرة التطعيم المستخدمة مستقيمة. ثقب إبرة التطعيم من مركز وسط وسط الثقافة حتى تكون قريبة من قاع الأنبوب ، ولكن لا تخترق ، ثم تسحب ببطء مسار الثقب الأصلي.

二 ، طريقة تشغيل الفصل:

1. طريقة فصل التخفيف

قم بتفريق العينة المفصولة إلى الحد الأدنى عن طريق التخفيف المستمر ، ثم ارسم كمية معينة في اللوحة ومزجها بوسيط الأجار المناسب للذوبان ، بحيث يتم تثبيت البكتيريا المشتتة في مكانها لتشكيل مستعمرة واحدة. يتم تحضير Escherichia coli أو الخميرة بالماء المعقم كتعليق بكتيري. تأخذ عدة أنابيب اختبار معقمة ، تحتوي كل منها على 9 من الماء المعقم. ماصة 1 من التعليق والبكتيريا المحضرة في أنبوب الاختبار الأول الذي يحتوي على 9 من الماء المعقم ، بحيث يتم تخفيفه 10 مرات ، وهو 10-2. ارسم 1 من أنبوب الاختبار الأول (10-2) وحقنه في أنبوب الاختبار الثاني الذي يحتوي على ماء معقم ، بحيث يتم تخفيفه ، وهو 10-2. تعمل بنفس الطريقة حتى يتم تخفيفها إلى 10-5-10-6. ارسم بعناية من المحلول الجرثومي لكل تخفيف في 10-5-10-6 وأضفه إلى الطبق الفارغ المرقم. كرر نفس التخفيف لجعل ثلاثة أطباق. صب وسط الآجار الذي تم ذوبانه وتبريده إلى 45 في كل من الأطباق المذكورة أعلاه ، تدوير بلطف لخلط الوسط وتعليق البكتيريا بدقة ، بعد التصلب ، ضعها في حاضنة درجة 37 أو 38 واحتضانها لمدة 24-48 ساعة ، ومراقبة نمو وتوزيع المستعمرات على اللوحة.

2. طريقة فصل الكاتب المسطحة

طريقة فصل الصفائح هي طريقة لفصل الكائنات الحية الدقيقة عن طريق تقسيم حلقة التطعيم على سطح وسط اللوحة عن طريق تقسيم المناطق. المبدأ هو تخفيف العينة الميكروبية "من نقطة إلى خط" على سطح الوسط الصلب عدة مرات لتحقيق الغرض من الفصل. صب لوحة حل خلاصة لحم البقر بيبتون متوسط أجار ، صب الطبق ، والسماح لها الوقوف أفقيا حتى مجموعات. حرق حلقة التطعيم على لهب مصباح الكحول ، وانتظر التبريد ، خذ سائل تلقيح مختلط من المكورات العنقودية الذهبية والإشريشيا القولونية. امسك طبق العجار في اليد اليسرى وارفع الغطاء قليلاً ، بينما يقترب من اللهب. أمسك حلقة التطعيم في اليمين وتمتد إلى الطبق. اصنع خط الكتابة في منطقة على اللوحة. حلقة التطعيم 30-40 درجة من سطح اللوحة. المس الزاوية بلطف ، واستخدم قوة معصمك للتزلق برفق على السطح. لا تخدش أو تضفي سطح الجهاز اللوحي على القاعدة. حرق كوب التطعيم لقتل السائل الجرثومي المتبقي على حلقة التطعيم. بعد التبريد ، تمديد حلقة التطعيم في الطبق. بعد إجراء اتصال صغير مع الخط الذي تم تجاوزه في المنطقة الأولى ، انعطف 90 درجة. ولا يزال يتم عبور المنطقتين. بعد وضع العلامات ، تطعيم كوب التطعيم ، بعد التبريد ، استخدم نفس الطريقة لرسم الخطوط في المناطق الأخرى. بعد وضع علامة على جميع الخطوط ، استخدم قلم تلوين خاص في الجزء السفلي من الطبق للإشارة إلى السلالة والتاريخ والمجموعة والاسم. ضع طبق بتري بأكمله رأسًا على عقب وضعه في حاضنة بدرجة حرارة ثابتة. 37 بعد 24-48 ساعة من الزراعة ، أخرجوا ومراقبهم. انتبه إلى خصائص مفتاح المستعمرة ، الحجم ، اللون ، الحافة ، الهيكل السطحي ، الشفافية ، إلخ.

三 ، الاحتياطات:

1. يجب أن تبقى غرفة التطعيم نظيفة ، وفرك أسطح الطاولات والجدران بسائل صابون الفينول المسحوق ، وتبخير بانتظام بحمض اللاكتيك أو الفورمالديهايد. قبل كل استخدام ، يجب تعقيمه بواسطة مصباح UV. تحقق بانتظام من عقم غرفة التطعيم. قبل دخول غرفة التطعيم ، يجب إجراء النظافة الشخصية أولاً ، ويجب استبدال أحذية العمل والقبعات وملابس العمل والأقنعة في الغرفة العازلة. يُسمح فقط باستخدام ملابس العمل وأحذية العمل والأقنعة في غرفة التطعيم. لا يُسمح له بالذهاب إلى أماكن أخرى ، ويجب استبداله وتطهيرها بانتظام. يجب وضع علامة على أنابيب الاختبار بالتلقيح والمثلجات والزجاجات باسم وتاريخ وسط الثقافة والإجهاد. يجب مسح جميع العناصر التي يتم نقلها إلى غرفة التطعيم نظيفة باستخدام الكحول في الغرفة العازلة. قبل تعقيم كلتا اليدين بالكحول أو شينجيير ، لا تترك لهب مصباح الكحول أثناء العملية ؛ لا توضع السدادة عشوائياً ؛ تحتاج أدوات التطعيم إلى تعقيم اللهب قبل وبعد الاستخدام.

2. يجب تنظيف الحاضنة وتطهيرها بشكل متكرر.